蛋白质样本制备及IEF时样本上样对乳腺癌蛋白质2-DE分离结果的影响

摘要

目的 通过对蛋白质样本制备及IEF蛋白质上样时几个重要环节进行探讨,为乳腺癌组织蛋白质样本2-DE分离结果优化提供重要的实验与理论的依据.方法 通过Bio-Rad公司提供的试剂盒对乳腺癌组织进行总蛋白提取、蛋白质纯化、蛋白质定量,并分别对处理前后的乳腺癌蛋白质样本进行SDS-PAGE与2-DE分离.结果 乳腺癌组织蛋白质的等电点主要集中在p15～8范围内,SDS-PAGE、蛋白质样本纯化与定量等措施及适当的IEF上样体积与上样量可获得良好的2-DE蛋白质分离结果.结论 样本制备是2-DE蛋白质分离的关键,准确的取材、蛋白质样本的SDS-PAGE质量监测、适量的样本上样体积与上样量、适当的pH值范围的IPG胶条的选择以及采用蛋白质纯化试剂盒对蛋白质样本进行纯化与浓缩是整个实验成功的保证.