大鼠心肌线粒体蛋白质组学样本制备方法学的探讨

摘要

目的 寻找心肌线粒体蛋白质组学研究中样本制备关键环节的可行性方案.方法 分为组织匀浆组(TH组)、差数离心提取心肌线粒体组(CM组)及差数离心后再通过Nycodenz密度梯度离心法提纯线粒体组(PM组).通过Western blot法检测各亚细胞器标志性蛋白的含量验证线粒体的纯度,提取CM组与PM组中的蛋白质行双向凝胶电泳(2-DE),观察硝酸银染色后CM组与PM组的凝胶图像,选取PM组中的部分蛋白质斑点酶解后质谱鉴定.结果 本实验提纯的线粒体纯度较高;PM组蛋白质2-DE后凝胶银染图像较CM组更清晰,背景更佳;选取的部分蛋白质经鉴定均为线粒体蛋白.结论 本实验为心肌线粒体蛋白质组学研究中的样本制备提供了较好的方法.