应用DNA多聚酶链反应检测肝组织中甲型肝炎病毒基因

摘要

本文旨在研究以试管内酶促方法扩增目的基因。即多聚酶链反应来检测黑猩猩冷冻肝组织中编码部分VP_1的HAV基因。实验包括二个步骤:1.特定的部分HAV RNA基因转录成单链cDNA;2.通过25次聚合循环使cDNA扩增。反应产物经电泳和吸印后,以针对二个引物间部分基因的探针进行分子杂交予以证实。HAV基因扩增可提高检测敏感性以至可分析仅5μm厚的肝组织切片。为避免酚-氯仿抽提引起RNA损失,组织切片经95℃加热3min或5min后直接以多聚酶链反应扩增。二份认为含HAV的组织切片经扩增后出现阳性条带,另一份未经扩增的同样标本无条带可见。以多聚晦链反应技术对组织显微切片中病毒的敏感分析可作目的基因在组织中的定值和扩增,此基因供进一步分析。