CVB3VP1/pcDNA3真核表达质粒的构建及免疫效果观察

摘要

用ＲＴＰＣＲ从ＣＶＢ３ 感染细胞中扩增出ＶＰ１ 片段，重组入真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３ 中，转化大肠杆菌Ｃ６００，扩增后的质粒经ＣｓＣｌ 密度梯度离心纯化，体外转染ＣＯＳ７ 细胞，用ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ 检测表达产物；并经胫骨前肌注射小鼠，每鼠１００μｇ／ 次，隔４ 周加强一次，共３ 次。免疫后不同时间检测抗体、淋巴细胞增殖反应等免疫指标。结果显示重组质粒体外转染真核细胞表达ＶＰ１ 蛋白，免疫小鼠后产生了特异性抗体和淋巴细胞增殖反应。表明ＣＶＢ３ ＶＰ１ ＤＮＡ疫苗获得初步有效结果。