凝胶成像系统对核酸扩增产物的定量检测

摘要

目的 建立一种PCR-凝胶成像系统定量分析核酸扩增产物的方法．方法：1．用PCR荧光定量分析仪实时监测PCR扩增曲线，并选择合适的扩增循环次数，2．将梯度标准血清(101～106拷贝／u1)分别进行40，35及32次循环次数的扩增，在琼脂糖电泳，EB染色后，进行凝胶分析；3．选择凝胶分析软件中能客观反映核酸实际含量的最适参数，制定标准曲线。结果:40及35次循环时，在101～104拷贝／ul，线性良好，而在104，105及106拷贝／ul三个梯度时直线上升缓慢，趋于平坦；32次循环时，10拷贝／ul未能检出，102～106拷贝／ul的5个梯度的模板(对数值)与产物(体积)有良好的线性关系(r=0．97)。结论：32次循环线性范围较广，为最适循环次数；在UVIband的光密度定量分析指标中，以体积或体积百分比作为定量指标较好；本法除可用于常规PCR产物定量(HBV-DNA，TB—DNA)，也适用于RT-PCR(HCV-RNA)。