miR-664b-3p调控Caspase-1介导细胞焦亡在深静脉血栓形成中的作用

摘要

目的 观察深静脉血栓形成(DVT)患者外周血微小RNA-664b-3p(miR-664b-3p)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)水平变化,分析二者在细胞焦亡中的调控关系.方法 选择健康志愿者(健康对照组)和DVT患者(DVT组)各30例,空腹抽取外周静脉血,分离血清及单个核细胞(PBMC).Western blotting法检测PBMC中活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Cleaved Caspase-1)、焦孔素D(GSDMD)活性片段(GSDMD-N)蛋白,qPCR法检测PBMC中的miR-664b-3p,ELISA法检测血清中的细胞焦亡相关炎症因子白细胞介素(IL)1β和IL-18蛋白.采用Target Scan 7.2生物信息学软件,预测miR-664b-3p与Caspase-1 mRNA的3′非翻译区(3′UTR)是否存在互补结合位点;分别构建包含结合位点的野生型及突变型Caspase-1 mRNA 3′UTR质粒,双荧光素酶报告基因系统检测miR-664b-3p对其荧光素酶报告基因活性的影响.结果 DVT组PBMC中Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白表达及血清IL-1β、IL-18蛋白水平均高于健康对照组,miR-664b-3p表达低于健康对照组(P均0.05).结论 DVT患者PBMC中miR-664b-3p表达降低,可解除对靶基因Caspase-1的表达抑制,Caspase-1活性增强使GS?DMD-N表达升高,进而导致细胞焦亡及相关炎症因子(IL-1β、IL-18)表达升高,最终导致DVT.