手足口病毒诱导肠上皮细胞差异表达miRNA的筛选及其在患儿粪便标本中的诊断效能分析

摘要

目的 筛选两种常见手足口病毒肠病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)感染诱导人肠上皮细胞系(HIEC)差异表达的miRNA,并分析其在手足口病患儿粪便标本中的诊断价值.方法 将EV71和CA16分别与HIEC共培养,感染复数为10,培养0、24、48、96 h后,行miRNA微阵列芯片分析,筛选差异表达miRNA.将HIEC分为观察组和对照组,观察组感染临床手足口病患儿分离病毒株46株,对照组不感染病毒株.培养72 h,采用实时荧光定量PCR法检测芯片筛选出的差异表达miRNA相对表达量,选择变化最大的前4种miRNA作为粪便miRNA联合检测法的靶标.选择手足口病患儿40例和健康体检儿童52例,比较粪便miRNA联合检测法、血清IgM抗体检测法、咽拭子病毒核酸检测法的诊断效能.结果 miRNA微阵列芯片检测结果显示,HIEC感染EV71、CA16后miR-526a、miR-23b、miR-619-5p、miR-204-5p、miR-5585-3p和miR-146a表达明显升高且相对升高倍数均>2.观察组较对照组升高幅度最大的前4个miRNA分别为miR-23b、miR-619-5p、miR-204-5p、miR-5585-3p(P均<0.01).粪便miRNA联合检测法对手足口病的阳性检出率为87.5％、灵敏度为90.91％、特异度为84.09％、准确性为92.30％,血清IgM抗体检测法对手足口病的阳性检出率为37.5％、灵敏度为63.64％、特异度为85.71％、准确性为70.60％,咽拭子病毒核酸检测法对手足口病的阳性检出率为90.0％、灵敏度为88.64％、特异度为92.86％、准确性为95.65％.结论 EV71和CA16诱导HIEC表达明显升高的miRNA分别为miR-23b、miR-619-5p、miR-204-5p、miR-5585-3p,以其作为靶标进行粪便miRNA联合检测对手足口病的诊断价值较高.