叙利亚金黄地鼠血管平滑肌细胞的分离、培养及鉴定

摘要

目的 分离、培养叙利亚金黄地鼠的血管平滑肌细胞,并对其进行鉴定及生长观察.方法 取3～4周龄雄性叙利亚金黄地鼠2只,处死后取主动脉,采用组织块贴壁法对血管平滑肌细胞进行分离、原代和传代培养.采用倒置相差显微镜对原代培养3d后的细胞及前3代传代细胞进行形态学观察.取第3代对数生长期的血管平滑肌细胞,采用细胞免疫荧光技术观察平滑肌细胞特异性标志因子平滑肌肌动蛋白 α(α-SMA)、平滑肌22α(SM22α)染色情况,采用CCK-8法检测细胞培养1～7 d的增殖能力(OD值).结果 原代培养3～5 d,有少量血管平滑肌细胞从组织中爬出,呈贴壁生长;原代培养7～9 d,细胞呈梭形或三角形,生命力旺盛,折光度好;原代培养9 d后,细胞增殖能力明显增强,细胞数量增多,细胞与细胞间排列紧密,出现"峰-谷"状特征;原代培养15 d左右可以进行传代培养.前3代传代细胞与原代细胞相比,形态无明显变化.细胞免疫荧光结果显示,α-SMA、SM22α将细胞质染成绿色,血管平滑肌细胞纯度>95％.血管平滑肌细胞培养1～7 d的OD值分别为0.4373±0.0215、0.4600±0.0188、0.6143±0.0225、0.8453±0.0274、0.8625±0.0240、0.8280±0.0271、0.8160±0.0202.结论 成功采用组织块贴壁法分离培养出叙利亚金黄地鼠原代血管平滑肌细胞,细胞传代后2～4 d处于对数生长期,是进行后续实验的最佳时期.