抑制MDR1基因表达shRNA RNAi系统的构建

摘要

目的构建抑制多药耐药基因(MDR1)表达的短发夹RNA(sh RNA)真核表达载体系统.方法根据MDR1基因已知序列,设计两段21个碱基的MDR1特异性靶序列,合成两对62nt 并含有编码shRNA序列的寡核苷酸,双链退火后,克隆到经过BamH I和Xba I双酶切后线性 PG E-1载体的U6启动子下游,重组构建RNA干扰(RNAi)质粒.结果对重新构建的pshRNA-MDR1载体经P CR扩增后行电泳分析,并对含有插入基因片段行测序分析.结果表明,62个碱基均成功插入到预计位点,并且序列完全一致.结论载体的成功构建为研究其对MDR1 基因表达的抑制作用打下基础,同时使我们发展了在体内合成siRNA的方法.