HSP70及 Ezrin 蛋白表达变化对人成骨肉瘤M G63细胞凋亡和增殖的影响

摘要

目的：分析人成骨肉瘤MG63细胞中热休克蛋白70（ HSP70）、细胞骨架蛋白（ Ezrin）的表达对该细胞凋亡和增殖的影响。方法首先在有双启动子的质粒载体pGFP-V-RS中构建能够表达HSP70和Ezrin蛋白shRNA的载体并重组质粒，将质粒转染入MG63细胞，分为联合表达组、单纯shRNA组、空白载体组，筛选稳定表达细胞培养增殖，采用RT-PCR及Western blotting法检测这两种蛋白基因表达情况与蛋白水平；Western blotting法检测凋亡相关蛋白，使用流式细胞术及噻唑蓝比色法分别检测第1、3、5、7天细胞凋亡及增殖率。结果联合表达组Ezrin mRNA及Ezrin蛋白合成量低于空白载体组和单纯shRNA组，HSP70 mRNA及HSP70蛋白合成量高于空白载体组和单纯shRNA组（ P均＜0．01），HSP70和Ezrin联合表达的MG63细胞构建成功。低表达Ezrin和高表达HSP70的载体质粒构建成功。联合表达组MG63细胞凋亡率（23．94％±0．48％）较空白载体组（10．96％±0．25％）高（ P＜0．01），增殖速度（308．67％±2．91％）较单纯shRNA组（394．80％±2．63％）慢（P＜0．01）；与空白载体组比较，单纯shRNA组、联合表达组第3、5、7天细胞增殖率降低，抑制率升高（ P均＜0．01）。与单纯shRNA组比较，联合表达组第3、5、7天细胞增殖率低，抑制率低（P均＜0．01）。结论高表达的HSP70和低表达的Ezrin在促进骨肉瘤细胞凋亡的同时减缓其增长速度。