抑制Dickkopf-1和Sclerostin表达对人成骨肉瘤细胞MG63骨代谢调节相关蛋白表达水平的影响

摘要

目的:观察抑制Dickkopf-1和Sclerostin表达对人成骨肉瘤细胞MG63骨代谢调节相关蛋白表达水平的影响。方法:培养MG63细胞,构建沉默Dickkopf-1重组腺病毒载体和沉默Sclerostin重组腺病毒载体。将培养好的MG63细胞(每孔2×105个)分为4组,Scr组以Scr腺病毒转染、Dickkopf-1组以沉默Dickkopf-1重组腺病毒载体转染、Sclerostin组以沉默Sclerostin重组腺病毒载体转染、Dickkopf-1+Sclerostin组以沉默Dickkopf-1重组腺病毒载体和沉默Sclerostin重组腺病毒载体共同转染。各组MG63细胞转染重组腺病毒48 h后以Western Blot法测定各组细胞中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、低密度脂蛋白受体相关蛋白-5(low density lipoprotein receptor-related protein-5,Lrp-5)、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)、Runt相关转录因子-2(Runt-related transcription factor-2,Runx-2)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等骨代谢调节相关蛋白的表达水平。结果:Dickkopf-1组的OPG表达量与Scr组、Sclerostin组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.050,P=0.196);Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的OPG表达量均高于Scr组(P=0.010,P=0.000);Dickkopf-1组和Sclerostin组的OPG表达量均低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000)。Dickkopf-1组、Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的Lrp-5表达量均高于Scr组(P=0.012,P=0.010,P=0.000);Dickkopf-1组的Lrp-5表达量与Sclerostin组比较,差异无统计学意义(P=0.119);Dickkopf-1组和Sclerostin组的Lrp-5表达量均低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000)。Dickkopf-1组的BMP-2表达量与Scr组比较,差异无统计学意义(P=0.185);Dickkopf-1组的BMP-2表达量低于Sclerostin组(P=0.037);Dickkopf-1组和Sclerostin组的BMP-2表达量均低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000)。Dickkopf-1组、Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的FGF-2表达量均高于Scr组(P=0.010,P=0.000,P=0.000);Dickkopf-1组的FGF-2表达量低于Sclerostin组和Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000);Sclerostin组的FGF-2表达量低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000)。Dickkopf-1组、Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的Runx-2表达量均高于Scr组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);Dickkopf-1组的Runx-2表达量低于Sclerostin组和Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000);Sclerostin组的Runx-2表达量低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000)。Dickkopf-1组、Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的CTGF表达量均高于Scr组(P=0.010,P=0.000,P=0.010);Dickkopf-1组的CTGF表达量与Sclerostin组比较,差异无统计学意义(P=0.080);Dickkopf-1组和Sclerostin组的CTGF表达量均低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.004)。Dickkopf-1组、Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的OPN表达量均高于Scr组(P=0.002,P=0.000,P=0.000);Dickkopf-1组和Dickkopf-1+Sclerostin组的OPN表达量与Sclerostin组比较,差异均无统计学意义(P=0.050,P=0.170);Dickkopf-1组的OPN表达量低于Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000)。Dickkopf-1组、Sclerostin组、Dickkopf-1+Sclerostin组的TNF-α表达量均低于Scr组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);Dickkopf-1组的TNF-α表达量高于Sclerostin组和Dickkopf-1+Sclerostin组(P=0.000,P=0.000);Sclerostin组和Dickkopf-1+Sclerostin组的TNF-α表达量比较,差异无统计学意义(P=0.125)。结论:抑制MG63细胞Dickkopf-1和Sclerostin表达,均能上调具有骨形成和双向调节作用的骨代谢调节相关蛋白表达水平、下调具有骨吸收作用的骨代谢调节相关蛋白表达水平,其中抑制Sclerostin表达对骨代谢调节相关蛋白表达水平的影响强于抑制Dickkopf-1表达,而且抑制Dickkopf-1和Sclerostin表达在调节骨代谢调节相关蛋白表达水平方面具有协同作用。