转染 Elf5基因的人卵巢癌干细胞增殖、侵袭能力及凋亡变化

摘要

目的：观察转染Elf5基因的人卵巢癌干细胞增殖、侵袭能力及凋亡变化。方法将目的基因Elf5＋EG-FP克隆到载体pcDNA3．1中，构建重组质粒pcDNA3．1-Elf5＋EGFP，转入感受态细胞，挑选阳性克隆菌落，大量抽提质粒。培养人卵巢癌干细胞并分为重组质粒组、空质粒组、空白对照组。重组质粒组转染pcDNA3．1-Elf5＋EG-FP真核表达载体，空质粒组转染pcDNA3．1-EGFP空载质粒，空白对照组不进行转染。采用Western blotting法检测Elf5蛋白。分别于转染后1、2、3、4、5、6 d采用MTT法检测细胞增殖能力；转染24 h后采用侵袭小室检测细胞侵袭能力并计算穿膜细胞数；转染24 h后流式细胞术检测不同周期细胞及凋亡细胞。结果成功构建了pcDNA3．1-Elf5＋EGFP真核细胞表达载体，重组质粒组细胞中Elf5蛋白稳定表达。转染后1、2、3、4、5、6 d重组质粒组细胞增殖能力低于空白对照组和空质粒组（ P均＜0．05）。重组质粒组穿膜细胞数少于空质粒组、空白对照组（ P均＜0．05）。重组质粒组G0／G1期细胞百分比高于空质粒组、空白对照组（P均＜0．05）。重组质粒组细胞凋亡率高于空质粒组、空白对照组（ P均＜0．05）。结论转染ELF5基因的人卵巢癌干细胞增殖、侵袭能力受到抑制，细胞凋亡增多。