小鼠肌源性干细胞悬浮培养的可行性

摘要

目的 探讨悬浮培养获取小鼠肌源性干细胞(MDSC)的可行性.方法 分离2周龄C57BL/6小鼠肌肉组织,采用悬浮培养法培养MDSC.分别于培养前(pp0)、培养2 h(pp1)及之后每24 h(共5次,分别标记为pp2、pp3、pp4、pp5和pp6)显微镜下观察悬浮细胞形态并计数.收集pp2～pp6时段含悬浮细胞的培养上清液,流式细胞仪检测CD34、抗干细胞抗原1(Sca-1)表达并计算其阳性细胞所占比例.取pp6时段MDSC,采用施万细胞诱导7天,观察细胞形态变化,免疫荧光检测细胞p75 NGF表达;另取pp6时段MDSC,进行成骨细胞诱导,观察细胞形态变化,并行茜素红染色.结果 镜下观察显示,随培养时间延长,悬浮细胞数量逐渐增多,细胞呈小球形,单个或成团,表面光滑,折光率高.pp2、pp3、pp4、pp5和pp6时段悬浮细胞数量分别为(2.64±0.20)×105、(3.08±0.19)×105、(3.63±0.13)×105、(4.64±0.15)×105、(6.06±0.26)×105个,各时段悬浮细胞数量两两比较P均<0.05.CD34+、Sca-1+、CD34++Sca-1+细胞所占比例随培养时间延长均逐渐增加(P均<0.05).施万细胞诱导培养7天,光镜下可见小球形、高折光率细胞逐渐分化为长条形、串珠样类施万细胞,部分细胞死亡,部分仍保持小球形;免疫荧光显示,约90％诱导细胞p75 NGF受体反应阳性.成骨诱导培养21天,光镜下可见小球形折光率高的细胞大量分化为长条形细胞,部分显示片状,有晶体形成.茜素红染色大部分红染,并可见棕褐色结晶状矿化结节形成.结论 悬浮培养法可获取初始细胞量约3倍的小鼠MDSC,且培养获得细胞具有良好的成神经、成骨分化能力.