转化生长因子β1对小鼠失神经骨骼肌肌源性干细胞内结缔组织生长因子合成的影响:量效与时效性分析

摘要

目的:观察不同质量浓度转化生长因子β1作用于体外培养小鼠失神经骨骼肌肌源性干细胞后,细胞内结缔组织生长因子生成的变化.方法:实验于2006-03/06在武汉协和医院中心实验室完成.实验材料:清洁级3周龄昆明种小鼠由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供(动物使用许可证:syxk(鄂)2004-0028).实验方法:采用差速贴壁法分离培养并鉴定小鼠失神经骨骼肌肌源性干细胞.取第2代肌源性干细胞,均匀加入6孔培养板中,每孔细胞数为104,置于37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养2 d后,更换培养液.A～F组每孔加入含有质量浓度0,1,5,10,20,40 μg/L重组人转化生长因子β1的含体积分数为0.2胎牛血清的DMEM培养基后,置于37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养3 d.G～L组每孔分别加入含有质量浓度为10 μg/L重组人转化生长因子β1的含体积分数为0.2胎牛血清的DMEM培养基后,同样条件培养箱中培养0,3,6,12,24,48 h.实时荧光定量RT-PCR检测结缔组织生长因子mRNA水平,应用Western blot检测结缔组织生长因子蛋白表达变化.结果:①Western blot检测结缔组织生长因子蛋白:可见阳性条带.A～D组平均吸光度比值随转化生长因子β1质量浓度增加而上升,组间差异具有显著性意义(0.854±0.157,1.203±0.144,2.471±0.141,3.652±0.202,P＜0.05),D～F组上升曲线趋于平缓,组间差异无显著性意义(3.652±0.202,3.736±0.216,3.919±0.226,P＞0.05).G～J组平均吸光度比值随转化生长因子β1质量浓度增加而上升,组间差异具有显著性意义(0.788±0.123,1.063±0.143,2.154±0.153,2.997±0.136,P＜0.05),J～L组上升曲线趋于平缓,组间差异无显著性意义.②RT-PCR检测结缔组织生长因子mRNA水平:A～D组结缔组织生长因子mRNA扩增量明显随转化生长因子β1质量浓度升高而上升,差异具有显著性意义(1.713±0.123,1.992+0.143,2.237±0.153,2.859±0.136,P＜0.05),E、F组间差异无显著性意义.G～J组结缔组织生长因子m RNA扩增量明显随转化生长因子β1质量浓度升高而上升,差异具有显著性意义(1.659±0.215,1.897±0.134,2.188±0.259,2.814±0.263,P＜0.05),J～L组间差异无显著性意义(P＞0.05).结论:转化生长因子β1能够促进体外培养小鼠肌源性干细胞生成结缔组织生长因子,在1～10 μg/L质量浓度范围内呈剂量依赖关系,在3～12 h范围内呈时间依赖关系.