Ad-HBV4.1在人肝癌细胞株HepG2中的复制情况及在BalB/C小鼠肝细胞中的表达观察

摘要

目的 观察复制型HBV重组腺病毒Ad-HBV4.1在人肝癌细胞株HepG2中的复制情况及在BalB/C小鼠肝细胞内的表达情况.方法 用HBV4.1片段与重组腺病毒同源重组构建Ad-HBV4.1,测算Ad-HBV4.1的感染复数(MOI).取MOI为100的Ad-HBV4.1感染HepG2细胞,采用免疫组化法检测Ad-HBV4.1感染的HepG2细胞HBsAg、HBcAg,采用Southern吸印杂交法检测细胞HBV DNA复制中间体HBV DNA复制中间体.取BalB/C小鼠30,分为5组,每组6只.一组1 mL的Ad-HBV4.1(约108 efu/mL)尾静脉普通注射,二组1 mL的Ad-HBV4.1腹腔注射.三组10μg的pHBV4.1片段用1.8 mL生理盐水稀释后,尾静脉高压5～8 s内完成注射.四、五组分别生理盐水1.8 mL尾静脉、腹腔注射.注射第3 d处死三组小鼠,注射第1、3、5 d处死其余各组小鼠,取出肝组织,采用免疫组化法检测各组小鼠肝组织HBcAg.结果 Ad-HBV4.1感染的HepG2胞质中存在HBcAg表达,阳性率达90％以上,HepG2细胞胞质中未见HBcAg表达.转染72 h时,HepG2细胞中未能检测到HBV DNA复制中间体;Ad-HBV4.1感染的HepG2细胞中存在HBV DNA复制中间体.第1、3 d时一组小鼠肝组织中未见HBcAg,第5 d小鼠肝组织中可见HBcAg;第3 d三组肝组织中可见HBcAg;各时段二、三、四组小鼠肝组织均未见HBcAg表达.结论 Ad-HBV4.1感染HepG2细胞成功建立HBV复制与表达的体外模型,感染效率达90％以上,可见HBsAg、HBcAg及HBV DNA复制中间体表达.Ad-HBV4.1尾静脉注射BalB/C小鼠肝组织存在HBV表达.