TET1过表达载体构建及其稳定过表达的宫颈癌HeLa细胞鉴定

摘要

目的 构建甲基胞嘧啶双加氧酶1(TET1)过表达载体并对其稳定过表达的宫颈癌HeLa细胞进行鉴定.方法 从人宫颈癌组织中扩增出 TET1目的片段并将其克隆到 pLVX-MYRF 载体上,构建真核表达载体pLVX-MYRF-TET1,进行双酶切及测序验证.选择宫颈癌HeLa细胞,随机分为TET1组、阴性对照组,采用脂质体转染法分别转染重组质粒pLVX-MYRF-TET1、空质粒pLVX-MYRF,采用Real-time PCR法和Western blotting法检测两组TET1 mRNA和蛋白表达.结果 经双酶切分析及测序验证,成功构建了真核表达载体pLVX-MYRF-TET1.与阴性对照组比较,TET1组TET1 mRNA和蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05).结论 成功构建TET1过表达载体pLVX-MYRF-TET1,并且能在宫颈癌HeLa细胞中稳定过表达.