脂质体转染
脂质体转染的相关文献在1993年到2022年内共计101篇,主要集中在基础医学、分子生物学、肿瘤学
等领域,其中期刊论文88篇、会议论文6篇、专利文献7987篇;相关期刊60种,包括生物技术通报、现代生物医学进展、中国病理生理杂志等;
相关会议6种,包括第三届情绪与健康和疾病及其中医药干预国际学术研讨会暨中医基础理论第七次学术年会、中国畜牧兽医学会2011学术年会、第十五次全国动物遗传育种学术讨论会等;脂质体转染的相关文献由448位作者贡献,包括何颖红、张小玉、段君君等。
脂质体转染
-研究学者
- 何颖红
- 张小玉
- 段君君
- 王江
- 贾霄
- 丁浩
- 于静雯
- 何颖红12
- 元佩燕
- 吴静
- 姜婉贞
- 孙国芳
- 孙达权
- 孙长凯
- 季平
- 张小玉12
- 张帆
- 张建
- 张振
- 张新金
- 张福军
- 徐帅妹
- 徐平平
- 徐艳花
- 战丽彬
- 方峰
- 朱长军
- 李先花
- 李建美
- 李莉好
- 李菊香
- 杨锐
- 杨阿碰
- 洪葵
- 王江12
- 石松
- 秦文明
- 程晓曙
- 童方丽
- 董智雄
- 谢彦晖
- 贾霄12
- 赵艳红
- 路小光
- 金由辛
- 闵锐
- 陈宏
- 陈容平
- 陈蕾
- 陶四明
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关云;
高彦晨;
张兴;
滕伟
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摘要:
目的采用新型阳离子共聚物脂多糖胺(lipopolysaccharide-amine,LPSA)与质粒构建脂多糖胺/质粒复合物(LPSA/pDNA),探究其理化性能随氮磷比(N/P)变化规律。方法构建含骨形态生成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)的非融合的真核表达质粒并鉴定。配置不同N/P的LPSA/pDNA复合物,凝胶阻滞实验探究LPSA与pDNA结合能力;动态光散射仪检测其粒径及zeta电位;透射电镜及原子力显微镜下观察LPSA/pDNA复合物形态;探究LPSA/pDNA复合物耐酶解能力随时间的变化规律。结果经琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定,真核表达载体BMP2编码序列片段与Genebank一致。随着N/P增加,LPSA/pDNA阻滞质粒DNA能力增加;当N/P>10时,LPSA可基本阻滞pDNA。LPSA/pDNA复合物的粒径随着N/P的增加先减小后增大,当N/P>3时,LPSA/pDNA粒径<150 nm;当N/P为12~25时,LPSA/pDNA粒径稳定于65 nm左右,LPSA/pDNA表面zeta电位呈正电性,电荷值为9~35 mV。当N/P为60时,随着DNaseⅠ处理时间增加,4 h内琼脂糖凝胶电泳条带亮度无明显变化,6 h时琼脂糖凝胶电泳条带亮度稍微减弱。结论N/P为12~25时,LPSA与pDNA形成直径约65 nm的阳离子复合物纳米囊泡。N/P为60时,LPSA可有效结合pDNA,LPSA/pDNA在4 h内,耐DNaseⅠ酶解。
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吴子贤;
吴静;
王荣;
周健;
王瑞雪;
刘俊阳;
刘佳森;
赵艳红
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摘要:
本研究旨在利用内蒙古绒山羊Wnt10b基因构建干扰质粒并转染耳皮肤细胞检测基因表达.以1岁龄内蒙古绒山羊为研究对象,扩增Wnt10b基因CDS序列,连接到pSGU6载体,构成pSGU6-Wnt10b重组质粒,并使用感受态细胞大量扩增提取,所得质粒转染至生长状态良好的内蒙古绒山羊耳皮肤细胞中,提取RNA利用Real Time PCR技术检测细胞中Wnt10b基因表达情况.结果显示:pSGU6-Wnt10b干扰载体经测序鉴定证明构建成功,转染至耳皮肤细胞24 h后出现绿色荧光,并在48 h后荧光强度最高,转染效率达到最大,实验组中Wnt10b mRNA表达量显著低于对照组.
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黄娟;
明露;
陈艳芬;
唐春萍;
张玉英;
杨超燕
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摘要:
目的 建立稳定表达TRPA1的HEK-293T细胞模型,并鉴定模型构建是否成功.方法 构建TRPA1真核表达质粒,采用脂质体转染法将其转入HEK-293T细胞中,经G418筛选稳定表达株,采用RT-PCR、免疫组化技术,检测HEK-293T细胞TRPA1基因的转录和蛋白的表达.结果 经酶切、测序证明,TRPA1基因的真核重组表达质粒已成功构建;PCR、免疫组化检测结果表明,将此重组质粒转入HEK-293T细胞可稳定表达TRPA1基因.结论 成功构建了能稳定表达TRPA1通道的HEK-293T细胞株,为体外研究TRPA1生理病理功能和筛选相关TRPA1通道调节剂奠定了基础.
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黄叶1;
吴延军1;
朱思燃1;
奉玲丽1;
瞿秋红1;
江雨航1;
夏琴1;
崔悦悦1;
莫家远1;
兰干球1
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摘要:
【目的】构建广西巴马小型猪结缔组织生长因子(CTGF)基因真核表达载体并鉴定其活性,为深入研究CTGF在癌症发生中的作用及其分子机制提供参考,也为构建CTGF转基因广西巴马小型猪及研发基于CTGF的癌症基因治疗策略提供理论依据。【方法】利用RT-PCR从广西巴马小型猪肝脏组织中克隆CTGF基因,并将CTGF基因亚克隆到pDsRed-N1载体上,然后通过脂质体转染小鼠Hep3B细胞,转染48h后于荧光显微镜下观察细胞是否表达红色荧光蛋白,同时利用在线生物信息学软件对其理化性质进行分析。【结果】成功克隆获得广西巴马小型猪CTGF基因编码区(CDS)序列,序列全长1050bp,共编码349个氨基酸,与NCBI上已公布普通猪参考序列的同源性为99.5%,有5处碱基突变,且均为同义突变。将广西巴马小型猪CTGF基因亚克隆到pDsRed-N1载体上成功构建了阅读框架正确的广西巴马小型猪CTGF基因真核表达载体,转染小鼠Hep3B细胞48h后有红色荧光蛋白表达。广西巴马小型猪CTGF蛋白具有较强的亲水性,其二级结构中α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲各占13.18%、5.73%、17.48%和63.61%。【结论】广西巴马小型猪CTGF基因在进化过程中的保守性非常稳定,通过构建的真核表达载体能转染小鼠Hep3B细胞并成功表达,可用于生产转基因广西巴马小型猪及研发与CTGF基因有关的疾病模型。
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周明;
李浩;
王子建;
李登科;
全正扬;
孙震晓
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摘要:
目的:利用常规脂质体介导转染shRNA(short hairpin RNA)建立CYP2E1 (cytochrome P450 2E1)表达沉默的人肝实质细胞模型.方法:采用文献报道的CYP2E1的高效干扰位点,构建CYP2E1的shRNA干扰载体(shCYP2E1)以及同源无干扰作用的对照载体(shNC,non-specific control),并通过阳离子脂质体LipoFiterTM介导转染人肝实质L02细胞,通过绿色荧光蛋白报告基因的表达指示及G418筛选阳性克隆,qRT-PCR (quantitative reverse transcription polymerase chain reaction)测定稳定转染细胞系中CYP2E1的表达情况.结果:确定转染后G418最佳筛选浓度为400 μg/mL,维持浓度为200 μg/mL;获得了荧光表达率较高的L02-CYP2E1细胞(CYP2E1沉默组)和L02-NC细胞(转染对照组);qRT-PCR结果显示,所建细胞系L02-CYP2E1相对于L02-NC,其CYP2E1表达下调了近70%(P<0.05),表明CYP2E1干扰表达细胞模型构建成功.结论:利用常规脂质体转染法成功转染人肝实质L02细胞CYP2E1 shRNA,建立了CYP2E1表达沉默的细胞系.%Objective:To build a CYP2El-silence human hepatic parenchymal cell line by conventional liposome-mediated RNA interference technology.Methods:Fluorescence labeling interference vector of CYP2E1 (shCYP2E1) and nonsense vector (shNC,non-specific control) were constructed on the reported efficient interfering sequence.These vectors were transfected into human hepatic parenchymal L02 cells by the cationic liposome LipoFiterTM.Positive cell clones were screened by G418 and expression of green fluorescent protein reporting gene.Expression of CYP2EI of these screened cells were determined by qRT-PCR.Results:The optimum selection concentration of G418 was 400 μg/mL and the maintenance concentration was 200 μg/mL.Stable transfected L02-CYP2E1 cells (transfected with vector of CYP2E1) and L02-NC cells(transfected with nonsense vector) were obtained.The qRT-PCR data showed that the CYP2E1 expression in L02-CYP2E1 cells reduced approximately 70 % to L02-NC cells (P<0.05),which suggested that L02 cell model with CYP2E1-silence was constructed successfully.Conclusions:CYP2E1-silence human hepatic parenchymal cell line was successfully constructed by conventional liposome-mediated RNA interference technology.
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HU Wei;
胡卫;
FANG Zhao-qin;
方肇勤;
LIANG Chao;
梁超;
GUAN Dong-yuan;
管冬元;
WU Zhong-Hua;
吴中华
- 《第三届情绪与健康和疾病及其中医药干预国际学术研讨会暨中医基础理论第七次学术年会》
| 2013年
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摘要:
目的:探讨PSMB9基因在肝癌形成过程中不同阶段的表达情况及其在肝癌细胞中的生物学功能.方法:1)以DEN(二乙基亚硝铵)诱发大鼠肝癌形成为模型,分别检测造模4、8、16、20周后肝脏组织PSMB9基因表达的差异;2)针对PSMB9基因mRNA序列设计2个siRNA靶点,构建重组质粒并经脂质体转染SMMC-7721人肝癌细胞株,并采用实时荧光定量PCR检测PSMB9基因的表达情况,MTT法检测细胞生长增殖情况.结果:1)芯片结果显示,PSMB9基因正常大鼠肝脏组织有一定的表达,造模过程中该表达量逐渐升高,至肝癌形成(造模20周)表达量为正常组的3倍左右;2)经实时荧光定量PCR检测到转染72h后该基因的表达水平明显降低;3)MTT的结果显示,该基因的两个干扰靶点转染144h后细胞的生长增殖得到了明显的抑制.结论:成功应用DEN诱发大鼠肝癌形成,PSMB9基因在肝癌形成的过程中表达逐渐升高,经进一步生物学功能研究证实,该基因可能与肝癌细胞的恶性增殖有关.
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李兰娟;
李君;
曹红翠;
徐威;
俞云松;
盛吉芳;
陈亚岗
- 《中华医学会第二届全国暨国际肝衰竭与人工肝学术会议》
| 2003年
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摘要:
目的:建立人源性永生化肝细胞系,为生物人工肝和肝细胞移植等提供合适的细胞源.方法:利用SV40LTag基因和真核表达载体pcDNA3.1(-)经脂质体转染至来源于25岁男性脑死亡者供肝的原代培养细胞,使其永生化,进一步鉴定其形态学特征和生物学功能.结果:经G418 700-300μg/ml筛选,42天后获一抗G418永生化肝细胞系.该细胞系呈单层贴壁、上皮细胞样形态生长,体外培养可无限传代,具有分泌ALB、ALT、AST及LDH的功能,超微结构观察发现,转染肝细胞具有原代培养肝细胞的大多数典型特征,如较大的细胞核、细胞内含有丰富的糖原颗粒、大量的线粒体和粗面内质网等.经RT-PCR和Westenr blot检测,转染肝细胞的ALB mRNA阳性和细胞色素P450 2E1阳性.结论:新建人源性肝细胞系与原代培养肝细胞具有类似的形态学特征和生物学功能.
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邓凡;
雷明科;
赵玉凤;
王存文;
吴元欣
- 《第五届全国化学工程与生物化工年会》
| 2008年
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摘要:
目的:观察人FADD基因在癌细胞中诱导表达,以及癌细胞的凋亡过程。方法:本实验选用人结肠癌细胞SW480、人大肠癌细胞LOVO、人直肠癌细胞Colo320。优化质粒pEGFP-N1的脂质体瞬时转染,得到转染最佳条件,后将FADD基因替换pEGFP-N1质粒中的EGFP基因,得到pEGFP-FADD质粒转染癌细胞,通过Gimsa染色,吖啶橙染色观察细胞形态和梯形带,TUNEL法的检测观察转染细胞生长和凋亡情况。结果:人结肠癌细胞SW480、人大肠癌细胞LOVO、人直肠癌细胞Colo320转染pEGFP-FADD质粒后,1-2d内人的FADD基因能诱导癌细胞发生形态变化和DNA断裂。结论:人FADD基因能诱导人结肠癌细胞SW480、人大肠癌细胞LOVO,人直肠癌细胞Colo320凋亡。
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邓凡;
雷明科;
赵玉凤;
王存文;
吴元欣
- 《第五届全国化学工程与生物化工年会》
| 2008年
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摘要:
目的:观察人FADD基因在癌细胞中诱导表达,以及癌细胞的凋亡过程。方法:本实验选用人结肠癌细胞SW480、人大肠癌细胞LOVO、人直肠癌细胞Colo320。优化质粒pEGFP-N1的脂质体瞬时转染,得到转染最佳条件,后将FADD基因替换pEGFP-N1质粒中的EGFP基因,得到pEGFP-FADD质粒转染癌细胞,通过Gimsa染色,吖啶橙染色观察细胞形态和梯形带,TUNEL法的检测观察转染细胞生长和凋亡情况。结果:人结肠癌细胞SW480、人大肠癌细胞LOVO、人直肠癌细胞Colo320转染pEGFP-FADD质粒后,1-2d内人的FADD基因能诱导癌细胞发生形态变化和DNA断裂。结论:人FADD基因能诱导人结肠癌细胞SW480、人大肠癌细胞LOVO,人直肠癌细胞Colo320凋亡。
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邓凡;
雷明科;
赵玉凤;
王存文;
吴元欣
- 《第五届全国化学工程与生物化工年会》
| 2008年
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摘要:
目的:观察人FADD基因在癌细胞中诱导表达,以及癌细胞的凋亡过程。方法:本实验选用人结肠癌细胞SW480、人大肠癌细胞LOVO、人直肠癌细胞Colo320。优化质粒pEGFP-N1的脂质体瞬时转染,得到转染最佳条件,后将FADD基因替换pEGFP-N1质粒中的EGFP基因,得到pEGFP-FADD质粒转染癌细胞,通过Gimsa染色,吖啶橙染色观察细胞形态和梯形带,TUNEL法的检测观察转染细胞生长和凋亡情况。结果:人结肠癌细胞SW480、人大肠癌细胞LOVO、人直肠癌细胞Colo320转染pEGFP-FADD质粒后,1-2d内人的FADD基因能诱导癌细胞发生形态变化和DNA断裂。结论:人FADD基因能诱导人结肠癌细胞SW480、人大肠癌细胞LOVO,人直肠癌细胞Colo320凋亡。
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邓凡;
雷明科;
赵玉凤;
王存文;
吴元欣
- 《第五届全国化学工程与生物化工年会》
| 2008年
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摘要:
目的:观察人FADD基因在癌细胞中诱导表达,以及癌细胞的凋亡过程。方法:本实验选用人结肠癌细胞SW480、人大肠癌细胞LOVO、人直肠癌细胞Colo320。优化质粒pEGFP-N1的脂质体瞬时转染,得到转染最佳条件,后将FADD基因替换pEGFP-N1质粒中的EGFP基因,得到pEGFP-FADD质粒转染癌细胞,通过Gimsa染色,吖啶橙染色观察细胞形态和梯形带,TUNEL法的检测观察转染细胞生长和凋亡情况。结果:人结肠癌细胞SW480、人大肠癌细胞LOVO、人直肠癌细胞Colo320转染pEGFP-FADD质粒后,1-2d内人的FADD基因能诱导癌细胞发生形态变化和DNA断裂。结论:人FADD基因能诱导人结肠癌细胞SW480、人大肠癌细胞LOVO,人直肠癌细胞Colo320凋亡。
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