重组人Ⅱ型胶原250-270多肽的表达、纯化和鉴定

摘要

目的:表达与纯化重组人Ⅱ型胶原250-270多肽(rhCⅡ250-270),鉴定并确认rhCⅡ250-270多肽与预期的相符.方法:在E.coli BL21中表达rhCⅡ 250-270多肽,使用亲和层析法分离纯化.用限制性酶切、聚合酶链式反应(PCR)、基因序列测定、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹等方法在基因和蛋白水平上对rhCⅡ250-270多肽进行鉴定.结果:纯化的rhCⅡ250-270多肽,大小约43 kD,纯度为89.3%.EcoRⅠ和SalⅠ双酶切法和PCR法鉴定测得DNA大小约为500bp和650bp,核苷酸序列测定证实基因DNA序列与设计的完全相符.SDS-PAGE显示rhCⅡ250-270多肽目的蛋白条带的大小约为43 kD, Western Blotting证实GST融合蛋白上存在CⅡ片段.结论:表达和纯化rhCⅡ250-270多肽与预期的相符,并发现此多肽具有较强的免疫原性.