松叶面抗虫共生工程菌的构建

摘要

将来自Bacillus thuringiensis subsp.kurstaki的杀虫基因cryIAc通过综合质粒载体pEG601,整合到松树共生细菌B.cereus(Bc752)的染色体上,得到的工程菌对马尾松毛虫幼虫有明显的杀虫活性.此综合质粒含有能在营养期表达Bt cryIAc基因的强启动子、cryIAc杀虫基因、四环素抗性标记基因tet、8.0 kb的EcoRI-Nco Ⅰ B.cereus (O147)染色体片段.将综合质粒通过电击导入Bc752中,综合质粒与Bc752染色体发生同源重组,将Bt cryIAc基因整合到Bc752的染色体上.通过对转化子的DNA酶切分析、PCR扩增、SDS-PAGE凝胶电泳检测、Western blot、电镜观察、毒力测定,结果表明Bt cryIAc基因已经整合到松树共生细菌Bc752的染色体上,并可高效表达.