NS2A序列对日本脑炎病毒NS1基因在原核系统中的体外表达的影响

摘要

用RT-PCR扩增并克隆了日本脑炎病毒弱毒株SA14-14-2的NS1、NS1′、NS1-2A的cDNA片段,分别将其亚克隆到原核表达载体pET-30b(+),构建了重组原核表达质粒pET30b-NS1、pET30b-NS1′、pET30b-NS1-2A,转化大肠杆菌BL-21(DE3),用IPTG诱导培养.结果表明,仅有pET30b-NS1质粒转化的菌株获得表达,而另外2种重组质粒转化的菌株均无表达.表达的融合蛋白分子量约为46 kD,约占菌体总蛋白的30.8%,Western blotting分析表明表达产物具有抗原活性.动物试验证实,重组NS1免疫小鼠蛋白可以抵抗强毒的攻击.笔者研究证实NS2A或部分NS2A的存在对于NS1的表达具有不利影响.