铜绿假单胞菌algL基因在毕赤酵母中的表达及其性质研究

摘要

[目的]通过构建毕赤酵母工程菌株,以期获得重组海藻酸裂解酶,并对其性质加以研究.[方法]采用PCR的方法,以铜绿假单胞菌(Pscudomonas aeruginosa)基因组DNA为模板,克隆出约1.0kb的海藻酸裂解酶基因algL的成熟蛋白编码序列,并将其插入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-algL.重组质粒线性化后用聚乙二醇(PEG)法导入毕赤酵母菌株GS115中表达.[结果]用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵,表达得到40kD的目的蛋白,酶活力达540U·ml-1左右.经测定,该重组酶的最适反应pH为8.5,最适反应温度为40°C,并且在20～45℃,pH 3.0～12.0具有较好的稳定性.50mmol·L-1的Co2+和Ca2+对酶活力均有显著的促进作用,Zn2+、Cu2+和Fe2+在不同浓度下对酶活力均有不同程度的抑制作用.在重组酶的辅助作用下,抗生素的抑菌效果明显提高.[结论]用重组毕赤酵母可高效表达外源海藻酸裂解酶,为其今后在工农业中的应用奠定了基础.