米曲霉A-F04的β-果糖基转移酶基因的克隆鉴定及其生物信息学分析

摘要

以实验室前期筛选出的高产β-果糖基转移酶（β-fructosyltransferase,β-FTase）的米曲霉（Aspergillus oryzae）菌株A-F04出发,提取米曲霉A-F04基因组DNA和RNA,采用PCR和RT-PCR技术克隆β-FTase基因,得到β-FTase基因完整编码序列和内含子序列,利用重组技术构建β-果糖基转移酶质粒基因库,并构建基因的进化树,预测β-FTase分子量、等电点、氨基酸组成等物化性质,预测其N-糖基化位点和信号肽,运用SWISS-MODEL对β-FTase的三级结构预测。结果显示,成功鉴定出菌株A-F04具有β-FTase基因;菌株A-F04的β-FTase基因编码区长度为1630 bp,含有一个52 bp的内含子,位于173 bp与224 bp之间;编码序列的开放阅读框总长为1578 bp;软件分析得知β-FTase为亲水性的稳定蛋白,其分子量为57.4653 ku,理论等电点为4.83,由525个氨基酸组成;可能的N-糖基化位点有6处;信号肽分析软件得知其编码的1~17位置处的氨基酸为信号肽;SWISS-MODEL构建的3个模型质量较高,有利于后期对β-FTase的结构和功能的研究。