猪囊胚microRNA定量PCR分析中适宜内参基因的选择

摘要

在定量PCR中，通常使用表达量恒定的基因作为内参对实验结果进行校正，以得到准确的定量结果．本实验用低密度芯片方法对猪体细胞核移植（SCNT）、体外受精（IVF）、体内受精（IVO）及孤雌（PA）囊胚的microRNA表达情况进行了定量分析，结果发现，4种类型胚胎共同表达的microRNA数目为36种，其中11种microRNA的表达量不受胚胎种类的影响（P＞0．05）．以这11种microRNA为候选内参基因用GeNorm（一种以两两比较为模型，计算样品中所有候选内参基因稳定值的程序，可得到样品中表达最为稳定的一对内参基因组合）及NormFinder（excel加载宏，以方差分析为模型对候选内参基因的稳定性进行分析，可得到稳定性最高的候选内参基因）方法分析发现miR-16表达最为稳定，以miR-16为内参得到的相对定量结果与用细胞数校正的定量结果一致，证实了miR-16是猪囊胚microRNA定量PCR分析的适宜内参基因．