人α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ荧光真核表达载体的构建及鉴定

摘要

目的:构建并鉴定绿色荧光蛋白为报告基因的pIRES2-EGFP-FUT7真核表达载体.方法:采用RT-PCR方法获得α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ(FUT7)全长基因,克隆至pMD18-T Simple载体后,将FUT7亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体并进行鉴定.通过脂质体转染到子宫内膜RL95-2细胞中,荧光显微镜下观察并经RT-PCR检测FUT7的表达.结果:测序及酶切鉴定证明获得人全长FUT7基因,FUT7基因正确插入pIRES2-EGFP中,在荧光显微镜下观察到了绿色荧光蛋白在RL95-2细胞中的表达,半定量RT-PCR检测结果显示FUT7的表达明显增加.结论:成功构建了绿色荧光蛋白为报告基因的FUT7真核表达载体,并检测到在RL95-2细胞中的表达,为研究FUT7及其合成的糖抗原sLex在胚胎着床中的作用奠定了基础.