miRNA-19对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其机制研究

摘要

目的 探讨miR-19在葡萄膜黑色素瘤(UM)细胞中的表达及其对UM细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法 qRT-PCR检测正常视网膜上皮细胞系ARPE-19和UM细胞系 SP6.5、M23中 miR-19的表达.将 M23细胞分为 miR-19 inhibitor 组(转染 miR-19-inhibitor)及miR-19 NC组(转染scramble),MTT法检测各组细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测表皮生长因子受体(EG-FR)/丝氨酸-苏氨酸激酶(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路蛋白表达.结果 正常视网膜上皮细胞系ARPE-19中miR-19相对表达量为1.35±0.13,均显著低于UM细胞系SP6.5与M23中miR-19相对表达量8.35±0.73和9.35±0.43(均为P＜0.01).M23细胞转染后,miR-19 inhibitor 组中 miR-19表达量低于 miR-19 NC 组(1.05±0.33 vs 8.05±0.64,P＜0.01).MTT 法检测结果显示,转染24 h,miR-19 inhibitor组与miR-19 NC组光密度值比较,差异无统计学意义(P＞0.05);转染48 h、72 h、96 h,miR-19 inhibitor 组光密度值均低于 miR-19 NC 组(均为 P＜0.05).miR-19 inhibitor 组细胞凋亡率高于 miR-19 NC 组[(15.34±2.35)％vs(8.23±0.72)％,P＜0.05].miR-19 inhibitor 组细胞划痕愈合率低于 miR-19 NC 组[(23.7±2.1)％vs(68.9±5.1)％,P＜0.05].miR-19 inhibitor 组侵袭细胞数少于 miR-19 NC 组[(45.1±3.9)个vs(115.3±8.9)个,P＜0.05].miR-19 inhibitor 组 UM 细胞系 M23 EGFR 蛋白表达量低于 miR-19 NC 组(0.43±0.03vs 1.02±0.02,P＜0.05).miR-19 inhibitor 组 AKT 蛋白表达量低于 miR-19 NC 组(0.52±0.04 vs 1.12±0.05,P＜0.05).miR-19 inhibitor 组 mTOR 蛋白表达量低于 miR-19 NC 组(0.63±0.05 vs 1.41±0.06,P＜0.05).结论 敲低miR-19表达可抑制UM细胞增殖、迁移和侵袭能力并促进凋亡,其机制可能与EGFR/AKT/mTOR信号通路被抑制有关.