慢病毒介导miR-34a表达对视网膜母细胞瘤自噬的影响及机制研究

摘要

目的 探讨慢病毒介导miR-34a表达对视网膜母细胞瘤自噬的影响并对其机制进行研究.方法 取对数生长期的Y79细胞,将转染miR-34a的慢病毒载体、转染高迁移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)载体、共转染miR-34a+HMGB1的慢病毒载体及培养液接种至Y79细胞构建转染miR-34a细胞系.按照接种载体分组,将Y79细胞株分为4组,分别为转染miR-34a组、转染HMGB1组、共转染miR-34a+HMGB1组及阴性对照组.用qRT-PCR检测miR-34a的表达,采用Capase3检测试剂盒检测Caspase3活性.采用流式细胞仪及单丹磺酰尸胺(monodansyl cadaverin,MDC)试剂盒在488 nm荧光下检测MDC荧光率,利用透射电子显微镜观察自噬超微结构.结果 miR-34a转染结果显示,转染miR-34a组miR-34a的相对表达量(2.04 ± 0.46)显著高于阴性对照组(1.03 ± 0.21)(P＜0.05),共转染miR-34a+HMGB1组的HMGB1的相对表达量(0.42 ± 0.08)显著低于转染HMGB1组(1.08 ± 0.16),差异有统计学意义(P＜0.05).Caspase3活性测试显示,转染miR-34a组Caspase3活性(10.75 ± 2.87)明显高于阴性对照组(3.48 ± 0.74),转染HMGB1组Caspase3活性(2.46 ± 0.94)低于共转染miR-34a+HMGB1组(6.21 ± 1.74),差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,转染miR-34a组MDC阳性率(56.94%)明显高于阴性对照组(2.15%), 共转染miR-34a+HMGB1组的MDC阳性率(43.11%)明显高于转染HMGB1组(10.32%)(P＜0.05).透射电子显微镜观察自噬超微结构显示,阴性对照组无明显改变,共转染miR-34a+HMGB1组可见Y79细胞双层膜结构,转染miR-34a组可见自噬溶酶体结构.结论 miR-34a促进视网膜母细胞瘤的自噬凋亡,其机制可能为抑制HMGB1的表达.