脂质体介导兔角膜内皮细胞基因转染的观察

摘要

目的 观察阳离子脂质体LipofectamineTM 2000能否介导目的 基因转移至兔角膜内皮细胞内及脂质体潜在的毒副作用.方法 RT-PCR检测特异性胶原Ⅷ进行细胞鉴定,通过体外细胞转染实验优化阳离子脂质体与质粒DNA的浓度和比例,选择LipofectamineTM 2000/pEGFP-N1比值3∶1,脂质体体积分别为0μL、6μL、9μL、12μL转染兔角膜内皮细胞,荧光显微镜观察目的 基因的表达,透射电镜观察细胞超微结构.结果 RT-PCR扩增得到单一产物,与预期的扩增序列大小完全一致,角膜内皮细胞内可见脂质体介导的绿色荧光蛋白表达,LipofectamineTM 2000浓度能显著影响其对兔角膜内皮细胞的转染效率,存在最佳浓度,在35 mm培养皿中,3 μg DNA与9μL脂质体转染效率最高,透射电镜显示12μL脂质体可导致细胞器出现肿胀、崩解现象.结论 阳离子脂质体可有效介导目的 基因转移至角膜内皮细胞内,在35 mm培养皿中,12μL脂质体对角膜内皮细胞有一定的毒副作用.