睾酮诱导牛眼小梁细胞组织型谷氨酰胺转移酶的表达

摘要

目的 观察睾酮对体外培养牛眼小梁细胞(bovine trabecular meshwork cells,BTMC)中的组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglutaminase,tTG)在mRNA水平和蛋白水平表达的影响,初步探讨睾酮与原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma,POAG)发病的关系.方法 取新生牛BTMC原代培养和传代培养,通过细胞形态学及免疫组化染色法进行鉴定后,取3～5代BTMC用于实验.用不同浓度的睾酮作用24 h.采用RT-PCR与Western-blotting方法检测不同浓度睾酮作用前后BTMC tTG表达水平的变化.结果 分别加入浓度为18×10-3 mmol·L-1、36×10-3 mmol·L-1、54×10-3 mmol·L-1、72×10-3 mmol·L-1睾酮的培养液作用后,RT-PCR产物电泳结果显示正常对照组(不合睾酮)、睾酮组均在433 bp处出现特异性的tTG基因条带,但睾酮组表达明显高于正常对照组；各组均在212 bp处出现β-actin的扩增产物的基因条带,且表达无明显差别.激光灰度值扫描进行半定量分析后,不同浓度睾酮组的tTG相对积分光密度值分别为1.461±0.021、2.111±0.016、2.536±0.032、3.176±0.026,其中后三个浓度组与正常对照组的相对积分光密度值1.487±0.013比较,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05),但18×10-3mmol·L-1睾酮组与正常对照组间差异无统计学意义.Western blotting检测结果显示tTG的蛋白表达水平也随睾酮浓度变化而变化.结论 雄激素睾酮可显著增加BTMC中tTG的表达.tTG的增加可能与POAG的发病有关.提示雄激素可能通过tTG作用而与POAG发病有一定关系.