体外培养不同代角膜缘干细胞特性分析

摘要

目的 比较不同代角膜缘干细胞的生物学特性,为角膜缘细胞移植在临床中的应用提供依据.方法 组织块培养法体外培养角膜缘干细胞,光镜观察、HE染色和免疫荧光染色分析原代、第1代和第2代角膜缘细胞形态学特性；流式细胞技术定量检测原代、第1代和第2代角膜缘细胞ABCG2表达；MTT比色法测定体外培养原代、第1代和第2代角膜缘干细胞的增殖活性变化.结果 倒置相差显微镜下可见原代细胞培养24h有单个细胞从组织块边缘迁出,48 h细胞局部可见拉网样生长趋势,72 h出现大片细胞,细胞呈现多边形或多角形,96 h细胞几乎铺满整个培养板.随着传代次数的增加,细胞形态变得不规则,CK3单克隆抗体表达阳性率逐渐增强；p63单克隆抗体原代和第1代细胞间表达阳性率无明显差别,第2代细胞表达量明显减弱.流式细胞检测显示原代、第1代和第2代细胞ABCG2表达阳性率分别为13.41％ 、22.96％和4.43％.MTT结果显示随传代次数增加细胞增殖活性逐渐下降.结论 原代和第1代角膜缘干细胞可以作为制备组织工程角膜上皮细胞膜片的较理想种子细胞.