色素上皮衍生因子对高糖刺激下大鼠视网膜Müller细胞凋亡的影响

摘要

目的 探讨色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)对高糖刺激下视网膜Müller细胞凋亡的影响,为PEDF治疗糖尿病视网膜病变提供实验依据.方法 实验分3组,分别是正常对照组、高糖模型(HG)组(培养基内含有25mmol·L-1的葡萄糖)和PEDF处理高糖模型(HG+PEDF)组(在高糖培养基础上加入25 mg·L-1的PEDF).反复胰蛋白酶消化法培养纯化SD大鼠视网膜Müller细胞,免疫荧光双标鉴定纯度;应用倒置相差显微镜观察Müller细胞形态,AnnexinⅤ-FITC、PI染色流式细胞技术检测Müller细胞的凋亡率,RT-PCR测定Müller细胞bcl-2、bax mRNA的表达变化.结果 原代培养的Müller细胞传至3代时纯度为95％以上.正常对照组、HG组、HG+ PEDF组Müller细胞早期凋亡率分别为(1.223±0.106)％、(2.657±0.120)％、(1.907±0.117)％,bax mRNA相对灰度值分别为0.269±0.041、0.804±0.052、0.528±0.018,bcl-2 mRNA相对灰度值分别为0.904±0.021、0.413±0.015、0.521±0.010.HG组与正常对照组相比,Müller细胞形态发生明显改变,细胞凋亡率显著增加(P ＜0.001),bax mRNA表达显著升高,bcl-2 mRNA表达显著降低(均为P＜0.01);HG+ PEDF组Müller细胞凋亡率较HG组显著降低(P＜0.001),bax mRNA表达显著降低,bcl-2 mRNA表达显著升高(均为P＜0.01),但仍有别于正常对照组(均为P＜0.05).结论 外源给予PEDF可以显著减少高糖刺激引起的Müller细胞的凋亡,对视网膜Müller细胞具有显著的保护作用.