二十二碳六烯酸经Rac1/NAPDH氧化酶/ROS/p38通路诱导ARPE-19细胞表达HO-1的机制

摘要

目的 观察二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)诱导人视网膜色素上皮细胞表达血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)-1的分子机制.方法 培养人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19,加入30～ 100μmol·L-1 DHA作用4～24 h.ELISA法检测Rac1的活性,Western blot检测HO-1的表达及NADPH氧化酶p47phox亚基和p38的磷酸化;荧光探针H2DCFDA检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生;采用Rac1抑制剂NSC23766、NADPH氧化酶抑制剂DPI、ROS清除剂NAC预处理细胞,检测其对HO-1表达的影响.结果 30 μmol·L-1、50 μmol·L-1和100 μmol·L-1 DHA作用ARPE-19细胞10 min后,Rac1的活性分别为(126.41±11.25)％、(185.05±15.41)％和(260.52±17.83)％,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P＜O.05).同时,100 μmol·L-1 DHA也能诱导p47 phox亚基磷酸化.30 μmol·L-1、50 μmol·L-1和100μmol·L-1 DHA处理4h后,细胞内ROS的含量分别为(132.52±8.33)％、(177.94±10.24)％和(211.62±7.14)％,与对照组相比,差异也均有统计学意义(均为P ＜0.05).对照组细胞中磷酸化p38含量为0.16±0.01;当给予30 μmol·L-1、50 μmol·L-1和100 μmol·L-1 DHA处理30 min后,磷酸化p38含量分别为0.28 ±0.03、0.37±0.02和0.45±0.00,与对照组相比,差异也均有统计学意义(均为P＜0.05);采用Rac1抑制剂NSC23766或NADPH氧化酶抑制剂DPI处理后,p47phox亚基的磷酸化水平和细胞内ROS水平显著降低;而采用NAC处理后,可抑制DHA诱导ARPE-19细胞表达HO-1.结论 DHA可能通过Rac1/NAPDH氧化酶/ROS/p38通路途径诱导视网膜色素上皮细胞表达HO-1,从而发挥对细胞的保护作用.