卡他莫拉菌经NADPH氧化酶/ROS/TGF-α信号通路诱导支气管上皮细胞表达MUC5AC

摘要

目的:初步探究卡他莫拉菌诱导支气管上皮细胞表达MUC5AC的分子机制,为阐明卡他莫拉菌的致病机制提供理论依据。方法:培养人正常支气管上皮细胞(BEAS-2B),采用不同感染复数(MOI=0.001、0.01、0.1)的卡他莫拉菌感染BEAS-2B细胞后,ELISA、qPCR分别检测细胞中TGF-α及MUC5AC含量,DCFH-DA法检测细胞内ROS水平,并通过Western blot检测细胞质及细胞膜上NADPH氧化酶p47phox的表达情况;ROS抑制剂NAC以及NADPH氧化酶抑制剂Apocynin预处理感染细胞后,分别检测细胞中MUC5AC、ROS及TGF-α水平;通过TGF-α中和抗体处理卡他莫拉菌感染的细胞,并检测细胞内MUC5AC的变化情况。最后采用ELISA检测卡他莫拉菌感染患者血清以及肺泡灌洗液中TGF-α以及MUC5AC分泌水平。结果:不同感染复数卡他莫拉菌感染细胞后能够显著诱导MUC5AC表达,且呈浓度依赖性;此外,在卡他莫拉菌感染的细胞内,ROS及TGF-α水平显著上升,细胞质内p47phox表达降低而细胞膜上p47phox表达则显著上升;ROS抑制剂及NADPH氧化酶抑制剂处理后,细胞中ROS、MUC5AC及TGF-α水平均明显减少;而采用TGF-α中和抗体处理也能够明显减少感染细胞内MUC5AC的分泌。此外,卡他莫拉菌感染患者血清以及肺泡灌洗液中TGF-α和MUC5AC分泌水平均显著高于正常组。结论:卡他莫拉菌能够通过激活NADPH氧化酶/ROS/TGF-α信号通路促进人支气管上皮细胞分泌MUC5AC。