柔嫩艾美耳球虫在鸡巨噬细胞中的培养及子孢子感染巨噬细胞细胞因子的mRNA水平

摘要

以鸡巨噬细胞(HD11)为柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的宿主细胞,将E.tenella子孢子体外接种HD11细胞,观察其入侵细胞、发育及诱导细胞抗感染免疫情况.用荧光探针和real-time PCR方法分别检测细胞内NO和ROS的含量和E.tenella感染相关的8种宿主细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12p40、IFN-γ、TNF-α、iNOS和IRF7)mRNA水平.结果显示,E.tenella子孢子成功入侵HD11细胞,但并没有发育迹象.与不刺激组相比,活子孢子刺激后HD11细胞内NO含量在4 hpi显著升高,8 hpi达到最高并且随时间变化不再降低,而ROS含量在2 hpi显著升高,6 hpi达到最高并且随时间变化逐渐降低.与不刺激组相比,活子孢子刺激HD11细胞IL-1β和iNOS mRNA表达水平在6 hpi显著增加(P<0.05),IL-6、IL-10、IL-12p40、IFN-γ、TNF-α、iNOS和IRF7在10 hpi显著增加(P<0.05).与不刺激组相比,热灭活子孢子刺激后HD11细胞IL-6和IFN-γmRNA表达水平在4 hpi显著增加(P<0.05),IL-1、TNF-α和iNOS在6 hpi显著增加(P<0.05),而IL-10、IL-12和IRF7在10 hpi显著增加(P<0.05).表明巨噬细胞抗球虫的免疫反应中,细胞因子的显著上调可能与机体抑制球虫发育增殖或清除球虫感染有关.