柔嫩艾美耳球虫感染早期鸡盲肠NOD样受体及相关免疫细胞因子的表达动态分析

摘要

针对病原微生物的入侵，宿主通过激活天然免疫及获得性免疫防御系统，以确保能够有效地清除入侵病原体。天然免疫系统作为宿主抗感染的第一道防线，通过模式识别受体(PRRs)识别病原体高度保守的病原相关分子模式(PAMPs)，从而激发宿主的免疫防御反应，达到清除入侵病原微生物的目的。NOD样受体(NOD-likereceptors，NLRs)是PRRs的一种，也是天然免疫与获得性免疫反应的中继者之一。目前有关NLRs的研究，在禽类及其抗感染免疫反应中的作用知之甚少。
　　柔嫩艾美耳球虫感染鸡的过程中，盲肠是受损伤最为严重的靶器官。盲肠上皮间淋巴细胞是抵御球虫感染的第一道防线，也是发挥抗虫免疫的重要成员之一。本研究初步分析探讨了鸡盲肠上皮间淋巴细胞NLRs及其相关细胞因子的表达动态与球虫感染的关系。给1日龄和21日龄雏鸡分别口服感染1×104个新鲜柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊后，在感染后第3、6、12、24、48、72小时，分别检测NLRC1、NLRC3、NLRC5、NLRP3及相关细胞因子IFN-α、IFN-β、IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-12、NF-kBp65、NF-kBp68c-rel和NF-kBrel_B的转录表达水平。结果显示，在21日龄雏鸡组，NLRC1、NLRC3、NLRC5、NLRP3的表达于感染后72小时(hourspost-infection，hpi)均达到一个峰值，而所检测细胞因子除IFN-α和IL-1β外，其余细胞因子也均上调至峰值。IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-1β和IL-12的表达水平，在1日龄鸡组3hpi时即可达到峰值，且随着时间的推移而显著下降;NF-kBp65是1日龄组在6hpi检测的所有细胞因子中上调最为明显的。TNF-α在21日龄鸡中的转录表达水平，自始至终都显著高于1日龄鸡，揭示其可能通过较为完善的天然免疫系统发挥作用。
　　本研究通过天然免疫的重要模式识别受体NLRs基因及相关细胞因子基因在抵抗感染过程中的表达动态，尝试探索了其中的关系与作用机制。

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摘要

图表目录

缩略词表

第一章 文献综述

1．球虫病与球虫生活史

2 与艾美耳球虫感染相关的宿主免疫应答

3．NOD样受体(NOD-like receptors，NLRs)与原虫感染

4 总结与展望

参考文献

第二章 鸡盲肠上皮间淋巴细胞的分离鉴定及鸡NLRs基因克隆

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第三章 荧光定量PCR检测方法的建立

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第四章 柔嫩艾美耳球虫感染早期NLRs及相关免疫细胞因子的表达动态

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第五章 全文总结

致谢