毕赤酵母工程菌株表达人溶菌酶-鲎素融合蛋白发酵条件的优化

摘要

能分泌表达重组人溶茵酶-鲎素融合蛋白的巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌(X33/pPICZαA-human lysozyme-Tachyplesin Ⅰ构建的).除了基因本身内在特性外,表达条件对外源基因的表达量也有着极显著的影响.本文在摇瓶水平上通过发酵液起始pH、甲醇诱导浓度、诱导时间这3个因素进行表达条件优化.通过生长曲线,Bradford检测以及平板扩散试验分析,获得摇瓶发酵表达人溶菌酶-鲎素融合蛋白的最佳条件为发酵液初始pH5.0,甲醇诱导浓度为2.0％,诱导时间为72 h；Bradford检测法分析显示表达量最高,平板扩散试验显示融合蛋白对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)抑菌能力最明显,为进一步大规模发酵表达人溶菌酶-鲎素融合蛋白奠定了基础.