禽呼肠病毒套式RT-PCR检测方法的建立

摘要

根据GenBank中登录的禽呼肠病毒(ARV)基因组序列,设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为478 bp,内部引物的扩增片段大小为247 bp,建立了适合ARV快速检测的套式RT-PCR方法(RT-nested-PCR).采用该方法对REV毒株进行了检测,均能扩增到247 bp的条带,而禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性腔上囊病病毒、减蛋综合征病毒、禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生病病毒、马立克病病毒和鸭瘟病毒的扩增结果均为阴性.该方法第1次扩增的敏感性是100 pg,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高105倍.该检测方法表明,所建立的逆转录套式RT-PCR方法比普通RT-PCR方法敏感性高,具有重复性好、特异性强、敏感性高等优点,可用于禽呼肠病毒的临床诊断、病料检测和分子流行病学调查等.