羊附红细胞体单管套式PCR检测方法的建立及初步应用

摘要

为了建立绒山羊附红细胞体单管套式PCR检测方法,根据GenBank上发表的羊附红细胞体16S rRNA基因序列,设计内、外2对特异性引物,建立单管套式PCR方法,同时进行了特异性、敏感性试验及临床检测.结果表明,本检测方法能够扩增基因片段大小为681 bp,与GenBank收录的相关序列同源性为97.6％～99.2％,而与牛温氏附红细胞体、猪附红细胞体、绵羊肺炎支原体、猪肺炎支原体、大肠埃希菌相关病原基因组均无交叉反应,能够检测出DNA的最小量为14.8 fg.对74份临床样品进行了检测,阳性率为43.2％,高于常规PCR和血涂片镜检测结果,表明本检测方法具有较高的敏感性,可用于羊附红细胞体感染的早期诊断,有较高的临床应用价值.