羊附红细胞体巢式PCR检测方法的建立与应用

摘要

为了建立一种更加准确、敏感的羊附红细胞体检测方法,根据GenBank上发表的羊附红细胞体16S rRNA基因序列(登录号:AF338268),设计内、外2对特异性引物,建立了巢式PCR检测方法.筛选该方法的最佳反应条件,并进行了特异性、敏感性、重复性试验及临床样本检测.结果表明,该方法能扩增出大小为506 bp的羊附红细胞体特异性片段,与GenBank收录的相关参考序列同源性为97.8％ ～99.6％;与猪附红细胞体、嗜吞噬细胞无浆体、绵羊无浆体、莫氏巴贝斯虫、吕氏泰勒虫基因组DNA均无交叉反应;DNA最低检测量为0.654 fg·μL-1;具有良好的重复性;对77份羊临床血液样品检测结果表明,羊附红细胞体感染率为71.43％,高于常规PCR和已报道的巢式PCR检测结果.