多杀性巴氏杆菌PurF蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

摘要

为了获得多杀性巴氏杆菌PurF蛋白及其多克隆抗体,通过PCR扩增了多杀性巴氏杆菌C51-17株purF基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,构建重组表达质粒pHT-PurF,转化至大肠埃希菌BL21 (DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达.SDS-PAGE检测表明,获得重组蛋白分子质量约56.5 ku,主要以包涵体形式存在；Western blot检测表明,表达的蛋白可与多杀性巴氏杆菌制备的高免血清发生特异性反应.将制备的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA检测血清抗体效价,结果显示制备的多克隆抗体滴度达到1∶128 000,Western blot表明可与多杀性巴氏杆菌PurF蛋白发生反应.本研究制备了多杀性巴氏杆菌的PurF蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究PurF蛋白在多杀性巴氏杆菌致病中的作用奠定了基础.