猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及S基因进化分析

摘要

从山东地区某大型养猪场疑似感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的仔猪肠道粪便中,利用ST细胞(猪睾丸细胞系)分离到1株病毒.通过噬斑克隆纯化、病毒理化特性、间接免疫荧光(IFA)、动物回归和RT-PCR进行鉴定.结果表明,病毒株在ST细胞形成形态均一.直径在2 mm～3 mm左右、外形圆而规则噬斑,耐酸,耐胰酶,对乙醚、氯仿、热比较敏感的RNA病毒;IFA鉴定采用共聚焦显微镜观察可见特异性细胞浆内橙红色荧光;动物回归试验出现典型猪传染性胃肠炎临床症状;RT-PCR扩增获得与预期目的基因片段大小一致的条带.综合分析以上结果,证明所分离到的病毒为TGEV,将其命名为TGEV-SDW1株.参照GenBank中TGEV S基因的核苷酸序列,用RT-PCR成功扩增获得分离株的S基因序列,并与Gen-Bank中公布的13株TGEV毒株的S基因序列进行同源性比较,并绘制系统发育进化树.结果表明,分离株S基因片段长为4 350 bp,与13株TGEV毒株氨基酸同源性很高,在96.0％～99.4％之间;核苷酸同源性与TH-98株最高,可达98.2％,与DAE株同源性最低,为77.7％.核苷酸系统进化树结果显示,分离株与中国KT2亲缘关系较近,处于同一分支,表明TGEV-SDW1株来自我国或我国周边国家的变异株.