细粒棘球绦虫EgM123基因序列分析及EgM家族基因在虫体不同发育阶段的差异表达分析

摘要

对细粒棘球绦虫EgM123基因进行分子克隆和生物信息学分析,同时对EgM家族基因在虫体不同发育阶段的mRNA转录水平进行初步研究.采集绵羊肝脏包囊中原头蚴,提取总RNA,通过RT-PCR获取EgM123纯化的PCR产物,克隆到pGEM-T载体并测序,对测序结果进行结构和功能的预测分析.以Actin基因为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR技术,对不同发育阶段,即其原头蚴和成虫的EgM4、EgM9、EgM123的表达量进行检测.结果表明,EgM123基因ORF为594 bp,编码197个氨基酸,蛋白分子质量为21.959 ku,等电点为7.94.EgM123蛋白无信号肽、跨膜螺旋区和卷曲螺旋结构,是一种亲水性的可溶性蛋白质,存在23个磷酸化位点.根据亚细胞定位预测显示,EgM123蛋白主要位于细胞核内.二级结构预测含盯螺旋9.64％、伊折叠22.84％、无规则卷曲62.94％.EgM123氨基酸序列中有6个潜在的抗原表位.RT-qPCR结果显示,成虫阶段EgM家族基因表达量极显著高于原头蚴阶段.在发育的同一阶段,EgM123基因极显著高于EgM4、EgM9基因的表达量.通过EgM家族基因在虫体不同发育阶段的mRNA转录水平,EgM123基因在虫体成虫阶段高表达,以期为筛选细粒棘球绦虫终末宿主疫苗候选基因提供理论依据.