细粒棘球绦虫EgM123蛋白融合霍乱毒素B亚单位疫苗的构建表达及免疫原性研究

摘要

目的 构建和表达细粒棘球绦虫成虫特异表达EgM123基因与霍乱毒素B的融合蛋白(CTB-EgM123);并确定CTB-EgM123蛋白的抗原性.方法 将合成EgM123基因序列连接到pET28a/CTB原核表达载体中,并转化至大肠杆菌BL21中.利用IPTG诱导目的基因的表达;用SDS-PAGE及Western-Blotting对表达蛋白进行分析和鉴定;用纯化蛋白免疫小鼠及犬,用ELISA方法对小鼠及犬的血清抗体效价和肠黏液的抗体亚类进行分析.结果 PCR和测序确定CTB-EgM123基因片段长度为804 bp,pET28a/CTB-EgM123原核表达阅读框序列正确.在37℃条件下,经IPTG 0.4 mmol/L诱导5h,获得CTB-EgM123高表达的包涵体蛋白,分子质量为37 kDa.免疫小鼠结果表明复性CTB-EgM123蛋白具较好免疫原性,抗体效价＞320 000;以IgG2a为主.检测免疫犬血清效价,结果发现用融合蛋白免疫后的犬血清抗体效价＞64 000,效价高于EgM123免疫组(t=0.0064,P＜0.05);且在4周时,抗体呈上升趋势,并能较长时间维持抗体水平.结论 原核表达载体pET28a/CTB-EgM123在大肠杆菌中成功表达,纯化蛋白接种小鼠和犬表明具有高的抗原性.表明CTB可以增强蛋白的免疫原性,并刺激小鼠和犬体内产生高水平的体液和黏膜免疫.本研究为研发犬用包虫病疫苗奠定了基础.