Nrf2对缺氧/复氧诱导的SH-SY5Y细胞线粒体分裂的影响

摘要

目的:通过体外模拟脑缺血再灌注损伤的细胞模型,探究核转录相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)与线粒体分裂是否存在调控关系.方法:通过三气培养箱和无糖培养基模拟氧糖剥夺/复氧(Oxygen and glucose depriva-tion/reperfusion,OGD/R)的条件,将OGD4 h、6h、8h和10h与R0 h、6h、12h、18h、24 h多个时间点组合,通过CCK8试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK8)检测细胞的存活率,最终以细胞凋亡明显但仍有半数存活的OGD4h/恢复R18h为条件建立细胞OGD/R模型;用Nrf2激动剂叔丁基对苯二酚(Tert-butylhydro quinone,tBHQ)和抑制剂鸦胆子苦醇(Brusatol,Bru)对细胞进行干预处理;蛋白免疫印迹(Western blot,WB)法检测Nrf2、动力相关蛋白1(Dynamin-related protein 1,Drp1)的表达量;制备细胞沉淀的切片,通过电镜观察细胞内线粒体的形态.结果:OGD/R+tBHQ组Nrf2蛋白的表达明显高于OGD/R组,且OGD/R+tBHQ组Drp1蛋白的表达则低于OGD/R组(P＜0.05),而OGD/R+Bru组Nrf2蛋白的表达低于OGD/R组,且OGD/R+Bru组Drp1蛋白的表达高于OGD/R组(P＜0.05);电镜观察结果显示OGD/R+tBHQ组线粒体分裂的程度和比例较OGD/R组有所减少,而在OGD/R+Bru组有增多(P＜0.05).结论:Nrf2对线粒体分裂有负向调控作用,可能机制是经由Drp1蛋白发挥作用.