人参皂苷Rb1对缺氧/复氧心肌细胞线粒体融合与分裂的影响

摘要

目的：探讨人参皂苷Rb1对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及其对线粒体融合与分裂的影响.方法：采用安宁包缺氧体系构建原代乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,并给予Rb1干预,实验分为正常对照组,缺氧/复氧6h组,缺氧/复氧12h组,缺氧/复氧24h组,Rb1-50μM组(缺氧/复氧+Rb1-50μM),Rb1-200μM组(缺氧/复氧+Rb1-200μM),通过流式细胞术检测凋亡率与ROS水平、real timePCR检测线粒体融合与分裂有关mRNA表达水平、western blot检测Drp1以及p53蛋白水平、通过激光共聚焦显微镜观察线粒体形态变化.结果：缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡(60.7％±2.0％),Rb1(50μM,200μM)处理可降低缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡率(41.0％±3.5％,***P＜0.001;31.9％±1.5％,***P＜0.001);与正常对照组(218.9±10.5)相比,缺氧/复氧组ROS水平升高(369.7±48.0,**P＜0.01),Rb1组ROS水平(270.9±9.9,*P＜0.05);与正常对照组相比,缺氧/复氧组Drp1 mRNA水平上升了约3倍(3.3±0.5,▲▲▲P＜0.001),而Fis1,Mfn1,Opa1 mRNA表达水平没有变化,Rb1可降低缺氧/复氧心肌细胞Drp1mRNA表达水平(2.4％±0.3％,▲P＜0.05),而对Fis1,Mfn1,Opa1 mRNA表达没有影响;缺氧/复氧诱导Drp1蛋白水平升高(4.6％±0.2％,***P＜0.001)、p53蛋白水平升高(3.8％±0.2％,△△△P＜0.001),Rb1可降低缺氧/复氧心肌细胞Drp1蛋白水平(2.5％±0.7％,△P＜0.05)、p53蛋白水平(2.5％±0.2％,#P＜0.05);与正常对照组(7.1％±3.1％)相比,缺氧/复氧诱导线粒体异常分裂(76.8％±6.4％,***P＜0.001),Rb1处理后可降低线粒体分裂水平(37.8％±3.8％,△△△P＜0.001).结论：(1)缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡,Rb1降低ROS水平、抑制心肌细胞凋亡;(2)Rb1抑制凋亡的作用与调控线粒体融合与分裂有关,其分子机制可能与抑制p53蛋白水平的升高,从而影响Drp1蛋白水平升高而达到抑制线粒体异常分裂有关.