板层人工角膜辐照法病毒灭活验证方法的建立及灭活效果验证

摘要

目的 建立板层人工角膜钴-60照射病毒灭活验证方法,用该方法对脂包膜病毒灭活效果进行验证.方法 以伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)为指示病毒,将干燥的板层人工角膜浸泡在高滴度病毒液中,在2～8℃浸泡5 h,经剪碎、研磨等步骤后4℃放置12 h,确立角膜吸附和释放病毒的条件.之后,将吸附病毒并呈干燥状态的角膜以0、5、10、15、20、25 kGy辐照剂量进行钴-60辐照,以确立的条件释放病毒并进行滴定,考察灭活效果.结果 板层角膜在2～8℃浸泡5 h可吸附足量病毒;病毒滴度可达到4 lg值以上,满足病毒灭活验证的要求.样品经25 kGy剂量钴-60照射后灭活PRV为2.75～3.25 lgTCID50/100μL,灭活后的样品在敏感细胞上盲传3代均未出现细胞病变.结论 成功建立了板层人工角膜病毒灭活验证的方法,并验证采用钴-60辐照法对PRV有较好的灭活效果.