人源分泌型血管内皮细胞生长因子受体flt-1(Ⅰ～Ⅳ区)的基因克隆及其腺病毒载体的构建和表达

摘要

肿瘤的生长、转移与血管形成密切相关,利用基因治疗的方法将抗血管形成的因子导入体内是目前肿瘤生物治疗研究的重要策略.血管内皮细胞生长因子(VEGF)在血管生成中起重要作用,因此阻断VEGF与相应受体的结合成为抗血管形成的重要靶点.通过RT-PCR从人脐静脉内皮细胞克隆了VEGF受体Flt-1的信号肽及胞外Ⅰ～Ⅳ区cDNA,即可溶性sFlt-1的cDNA片段.利用Ad-Easy体系, 在细菌BJ5183中同源重组后,转染包装细胞293,成功包装出重组flt-1腺病毒,利用它可有效地感染低分化胃黏液腺癌细胞株MGC803.经RT-PCR,免疫沉淀及免疫印迹等不同方法检测表明,被感染细胞能表达并分泌Flt-1的胞外区蛋白,为后续进行抗肿瘤血管形成的基因治疗研究奠定了基础.