活体肺癌组织玻璃化保存的研究

摘要

保存活体的肺癌组织将为肺癌发病基因筛查和靶向药物筛选等体外实验研究提供更完整的样本信息.本文对活体肺癌组织的玻璃化保存方法进行研究,首先采用针浸法玻璃化保存单块肺癌组织,对所需低温保护剂的浓度和平衡时间进行了优化;其次采用冻存管对多块肺癌组织样本进行玻璃化保存,对低温保护剂溶液体积以及平衡时间进行了优化;最后对慢速冷冻、不加低温保护剂快速冷冻、玻璃化冷冻3种冷冻方法的冻存效果进行比较并通过低温显微分析其冰晶损伤机理.结果表明,20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L海藻糖作为低温保护剂,在平衡溶液和玻璃化溶液分别加载3 min和1 min时,针浸法和0.25 ml冻存管内玻璃化冻存,复苏后组织活力最高,分别约为79.96%与80.44%.免疫组化显示玻璃化保存肺癌组织经过复苏后,相比慢速冷冻和无保护剂快速冷冻,组织结构损伤较小,组织内细胞TUNEL阳性表达较少.低温显微结果表明,玻璃化保存组织内部及周围只出现少量细小冰晶,而慢速冷冻、快速冷冻组织皆出现明显冰晶.