马铃薯软腐病菌Erwinia carotovora subsp.carotovora 714种胞外酶基因的克隆和原核表达分析

摘要

以马铃薯软腐病菌Erwinia carotovora subsp.carotovora 71(Ecc71)为材料,利用同源克隆技术克隆软腐病果胶酸盐裂解酶(pel)、多聚半乳糖醛酸酶(peh、纤维素酶(cel)和蛋白酶(prt)基因,对其进行生物信息学分析,并将其克隆到原核表达载体pET28a中,将重组载体pET28a-pel、pET28a-peh、pET28a-cel和pET28a-prt转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳鉴定和酶活测定,得到了与理论推算的pel、peh、cel和prt基因表达产物分子质量相符的特异条带,并且其酶活性分别为1.672 U·mL-1·h-1和0.024、112.7、16.95 U· mL-1·min-1.这些结果为今后探究这4种酶之间的相互作用及马铃薯抗病性研究奠定了基础.