流式细胞仪检测rhTNF-α对人正常精子线粒体功能和质膜完整性影响的实验研究

摘要

目的:观察rhTNF-α在体外对人正常精子线粒体功能和质膜完整性的影响.方法:56例健康成年男性手淫法获得精液,按照WHO精液标准分析,合格40例.Peroll梯度离心法得到的精子为精子模型,将精子密度调整为10×106/ml,与终浓度30 pg/ml、60 pg/ml、90 pg/ml、270 pg/ml的rhTNF-α分别在37℃、5% CO2的环境中孵育,同时设立对照组.在0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h时间段取样,用终浓度为10 μg/ml 的Rh123和PI双染色精子,流式细胞仪检测精子线粒体膜电位及质膜完整性的变化.结果:与对照组相比较,60 pg/ml、90 pg/ml、270 pg/ml各组的线粒体功能良好的精子明显减少,这种变化趋势与TNF-α浓度和孵育时间呈正相关(P﹤0.01).30pg/ml组的精子线粒体功能与对照组相比较无统计学差异(P>0.05);30pg/ml、60 pg/ml、90 pg/ml、270 pg/ml各组的PI染色阳性而Rh123染色阳性的精子数量较对照组多,并且与rhTNF-α浓度和孵育时间呈正相关(P﹤0.01).结论:rhTNF-α对人精子线粒体功能有一定的影响,提示有可能干扰精子的能量代谢,降低精子受精能力,并有可能通过线粒体凋亡途径,促进精子凋亡;同时影响精子质膜的完整性.