苏云金芽胞杆菌cry8Ea启动子区orf1片段缺失增强启动子活性

摘要

本文分别构建了cry8E基因上游的启动子(Porf18E)和其上游缺失org1基因的启动子(P△orf18E)融合lacZ基因的表达载体,通过β-半乳糖苷酶活性的分析,发现P△orf18E的转录活性高于Porf18E.分别用P△orf18E和Porf18E指导cry1Ac基因的表达,通过光学显微镜观察,发现两个启动子指导表达的Cry1Ac蛋白均可形成双锥形晶体;通过总蛋白定量分析发现,缺失or f1基因的启动子(P△orf18E)指导的Cry1Ac蛋白表达量高于Porf18E启动子指导的Cry1Ac蛋白表达量;生物活性测定表明:P△orf18E指导的Cry1Ac晶体蛋白对小菜蛾Plutella xylostella具有杀虫活性,高于Porf18E指导的Cry1Ac晶体蛋白对小菜蛾的杀虫活性.本文获得的强活性的启动子P△orf18E是目前已报道的转录活性最高的cry基因启动子,该启动子为Cry蛋白的表达和遗传工程菌株构建提供了重要元件.